2 × Taq Platinum PCR Mix
Jardueraren definizioa
1 unitate (U) Taq Platinum DNA Polimerasa jarduera honela definitzen da: 10 nmol desoxinukleotido azido disolbaezinak diren substantzietan 74 ° C-tan 30 minututan sartzeko behar den entzima kantitatea, izokin espermatozoidearen DNA aktibatua erabiliz plantila / primer gisa.
Kalitate kontrola
SDS-PAGE detekzioaren purutasuna% 99 baino gehiago da; Ez da nukleasa exogenoaren jarduerarik antzematen; Giza genoman kopia bakarreko genea modu eraginkorrean anplifika liteke; Ez da jarduera aldaketa garrantzitsurik gertatzen astean giro-tenperaturan gordetzen denean.
Parametro tekniko nagusiak
5′-3 ′ exonukleasa eta 3′-5 ′ exonukleasa ditu, eta bere fideltasuna Pfu polimerasaren ondoan dago. Taq Platinum Polymerase-ren luzapen-abiadura Pfu polimerasa baino azkarragoa da eta anplifikazio-eraginkortasuna handiagoa da. PCR produktuak mutur bortitzera zuzenean lotu daitezke edo TA bektorearekin klonatu. Klonazioaren eraginkortasuna hobetu behar bada, lehenik araztea eta 3'-dA gainaldeak gehitzea gomendatzen da TA bektorean klonatu aurretik.
One-tube Taq Platinum MasterMix (Produktu Teknologiko Handiko Ziurtagiri Nazionala)
■ Taq Platinum MasterMix-ek PCR erreakzioaren espezifikotasuna eta sentsibilitatea hobetu ditu eta GC eduki altuko, bigarren mailako egiturako eta horrelako txantiloi konplexuak anplifika ditzake. Helburu txantiloiaren 2 kopia handitu daitezke, emaitza esperimental zehatzagoak bermatuz.
■ Taq Platinum MasterMix formula paregabeak oso egonkorra bihurtzen du erreakzio sistema osoa, eta jarduera ez da eragingo izozte-desizozketa errepikatuak edo epe luzeko 4 ° C-tan biltegiratzeak.
■ Aurrez prestatutako PCR soluzio misto egonkor eta eraginkorrak eragiketa azkarra eta erraza egin dezake, lanaren intentsitatea eta laginketa-akatsak asko murriztuz. Errendimendu handiko PCR hobetzailea eta optimizatzailea ere nahasketan sartzen dira eta horrek PCR baldintzetan eskakizunak murrizten ditu.
■ Produktu honek tindagarriak dituzten eta tindagabeko sistemak ditu. Dye duten MasterMix produktuak zuzenean elektroforatu daitezke PCRren ondoren, kargatzeko bufferrik gehitu gabe.
Aplikazioak
Pfu polimerasa ordezkatu dezake fidagarritasun handiko produktuak anplifikatzeko, adibidez, genomak bezalako txantiloi konplexuetatik, eta egokia da adierazpen geneen klonazioa, gunearen berariazko mutazioak eta nukleotido bakarraren polimorfismoaren (SNP) analisia bezalako aplikazioetarako.
PCR primerak diseinatzeko neurriak:
Primer luzera 20-25 mer izan ohi da. Hala ere, zati luzeko PCR egitean, primeraren luzera 30-35 mer arte handitu behar da.
■ Ez dago parekatze osagarririk bi primatzaileen artean, batez ere 3 'muturreko azken 3 oinarrietarako.
■ GC edukiak% 50-60 izan behar du eta tokiko GC aberatsak edo AT saihestu. Horma eta txantiloia modu egonkorrean lotzeko, saihestu AT egitura aberatsa 3 'muturrean.
■ Saihestu primerak bigarren mailako egitura osatzeko.
■ Aukeratu Tm tenperatura bata bestearengandik bi primer.
PCRren Primerien Tm Balioaren Kalkulua:
■ Primerra 20 mer baino txikiagoa denean: Tm = 2 ° C × (A + T) + 4 ° C × (G + C).
■ Primer 20 mer baino gehiago denean: Tm = 81,5 + 0,41 × (% GC) - 600 / L, non L primeraren luzera den.
■ Ezarri erosketaren tenperatura (Tm-5) ° C-tan.
PCR Primer Sarrera
Primeren azken kontzentrazio egokia 0,1 μM eta 1,0 μM artean hauta daiteke. Primer kontzentrazio baxuegia izateak anplifikazio produktuen etekin txikia eragiten du, eta primer kontzentrazio altuegia anplifikazio ez espezifikoa izateko joera du. Normalean, txantiloien DNA kantitatea handia edo txantiloi DNA konplexua denean (adibidez, giza genomaren DNA) txantiloi gisa erabiltzen denean, primeraren kontzentrazioak txikiagoa izan behar du. Txantiloien DNA kantitatea txikia edo txantiloia (adibidez, DNA plasmidoa, etab.) Txantiloia bezala erabiltzen denean, primer kontzentrazioak handiagoa izan behar du.
Produktu guztiak ODM / OEMrako pertsonaliza daitezke. Xehetasunak lortzeko,mesedez sakatu Zerbitzu pertsonalizatua (ODM / OEM)
  |
Erabili DNA genomikoa txantiloi gisa 1 kb-ko zatia handitzeko. PCR erreakzioaren ondoren, hartu 5 μl elektroforesia detektatzeko. |
A-1 txantiloia
■ Txantiloiak proteinen ezpurutasunak edo Taq inhibitzaileak ditu, etab. —— ADN txantiloia araztu, proteinen ezpurutasunak kendu edo txantiloia DNA atera arazketa kitekin.
■ Txantiloiaren desnaturalizazioa ez da osoa —— Desnaturalizazio tenperatura egoki handitu eta desnaturalizazio denbora luzatu.
■ Txantiloiaren degradazioa ——Berriz prestatu txantiloia.
A-2 Primer
■ Primeren kalitate txarra —— Primera berriro sintetizatu.
■ Primerraren degradazioa ——Aliquot kontzentrazio handiko primerak bolumen txikian kontserbatzeko. Saihestu izozte eta desizozte ugari edo epe luzeko 4 ° C kriokontserbatuak.
■ Primerren diseinu desegokia (adibidez, primeraren luzera ez da nahikoa, primeren artean sortutako dimeroa, etab.) -Prendiseinatu primerak (primeraren dimerra eta bigarren mailako egitura sortzea saihestu)
A-3 Mg2+kontzentrazioa
■ Mg2+ kontzentrazioa baxuegia da ——Mg behar bezala handitu2+ kontzentrazioa: Mg optimizatu2+ kontzentrazioa 1 mM-tik 3 mM-ra bitarteko erreakzio batzuen bidez, 0,5 mM-ko tartearekin, Mg optimoa zehazteko2+ plantilla eta primer bakoitzeko kontzentrazioa.
A-4 Tenplatze tenperatura
■ Beroketa tenperatura altuak primeraren eta txantiloiaren loturan eragiten du. ——Erriztura tenperatura murriztu eta egoera optimizatu 2 ° C-ko gradientearekin.
A-5 Luzapen denbora
■ Luzapen denbora laburra —— Luzapen denbora handitu.
Fenomenoak: lagin negatiboek xede sekuentzia bandak ere erakusten dituzte.
A-1 PCR kutsadura
■ Helburu sekuentziaren edo anplifikazio produktuen kutsadura gurutzatua —— Kontuz sekuentzia xede duen lagina lagin negatiboan pipeta ez dadin edo isuri zentrifugazio hoditik. Erreaktiboak edo ekipoak autoklabatu egin beharko lirateke lehendik dauden azido nukleikoak ezabatzeko, eta kutsaduraren existentzia kontrol negatiboen esperimentuen bidez zehaztu beharko litzateke.
■ Erreaktiboen kutsadura ——Alikotatu erreaktiboak eta gorde tenperatura baxuan.
A-2 Primer
■ Mg2+ kontzentrazioa baxuegia da ——Mg behar bezala handitu2+ kontzentrazioa: Mg optimizatu2+ kontzentrazioa 1 mM-tik 3 mM-ra bitarteko erreakzio batzuen bidez, 0,5 mM-ko tartearekin, Mg optimoa zehazteko2+ plantilla eta primer bakoitzeko kontzentrazioa.
■ Primer diseinu okerra, eta xede sekuentziak homologia du xede ez den sekuentziarekin. ——Riseinatu primerak.
Fenomenoak: PCR anplifikazio bandak ez datoz bat espero zen tamainarekin, handiak edo txikiak, edo batzuetan anplifikazio banda zehatzak eta anplifikazio banda ez espezifikoak gertatzen dira.
A-1 Primer
■ Primer espezifikotasun eskasa
——Riseinatu primer.
■ Primer kontzentrazioa altuegia da ——Naturazio tenperatura behar bezala handitu eta desnaturalizazio denbora luzatu.
A-2 Mg2+ kontzentrazioa
■ Mg2+ kontzentrazioa altuegia da ——Mg2 + kontzentrazioa behar bezala murriztu: Mg optimizatu2+ kontzentrazioa 1 mM-tik 3 mM-ra bitarteko erreakzio batzuen bidez, 0,5 mM-ko tartearekin, Mg optimoa zehazteko2+ plantilla eta primer bakoitzeko kontzentrazioa.
A-3 Polimerasa termoestagarria
■ Gehiegizko entzima kantitatea —— Enzima kantitatea egoki murriztu 0,5 U-ko tarteetan.
A-4 Tenplatze tenperatura
■ Beroketa tenperatura baxuegia da ——Berriztaketa tenperatura egoki handitu edo bi etapetako beroketa metodoa hartu.
A-5 PCR zikloak
■ PCR ziklo gehiegi —— PCR ziklo kopurua murriztu.
A-1 Primer——Espezifizitate eskasa ——Mapa berriz diseinatu, primeraren posizioa eta luzera aldatu, bere espezifikotasuna hobetzeko; edo egin habiaratutako PCRa.
A-2 txantiloiaren DNA
——Txantila ez da purua—— Plantila araztu edo DNA atera arazketa kitekin.
A-3 Mg2+ kontzentrazioa
——Mg2+ kontzentrazioa altuegia da ——Mg behar bezala murriztu2+ kontzentrazioa: Mg optimizatu2+ kontzentrazioa 1 mM-tik 3 mM-ra bitarteko erreakzio batzuen bidez, 0,5 mM-ko tartearekin, Mg optimoa zehazteko2+ plantilla eta primer bakoitzeko kontzentrazioa.
A-4 dNTP
——DNTPen kontzentrazioa altuegia da ——DNTPren kontzentrazioa egoki murriztu
A-5 Errekurtso tenperatura
——Tiratze tenperatura baxuegia ——Tiro tenperatura behar bezala handitu
A-6 Zikloak
——Ziklo gehiegi ——Zikloaren zenbakia optimizatu
Lehenengo pausoa polimerasa egokia aukeratzea da. Taq polimerasa erregularrak ezin du zuzendu 3'-5 'exonukleasa aktibitatea falta delako eta ez datoz bat zatien luzapenaren eraginkortasuna asko murriztuko du. Hori dela eta, Taq polimerasa erregularrak ezin ditu 5 kb baino handiagoak diren xede zatiak handitu. Aldaketa berezia duen Taq polimerasa edo fideltasun handiko beste polimerasa hautatu behar da luzapenaren eraginkortasuna hobetzeko eta zati luzeko anplifikazioaren beharrak asetzeko. Gainera, zati luzeen anplifikazioak primeraren diseinua, desnaturalizazio denbora, luzapen denbora, buffer pH-a eta abar egokitzea ere eskatzen du. Normalean, 18-24 bp-ko primerek errendimendu hobea izan dezakete. Txantiloiaren kalteak ekiditeko, 94 ° C-ko desnaturalizazio-denbora 30 segundotan edo gutxiagora murriztu behar da ziklo bakoitzeko, eta tenperatura 94 ° C-ra igotzeko anplifikazioa egin aurretik minutu 1 baino gutxiago izan behar da. Gainera, luzapen-tenperatura 68 ° C-tan kokatzeak eta luzapen-denbora 1 kb / min-ko abiaduraren arabera diseinatzeak zati luzeen anplifikazio eraginkorra ziurtatu dezake.
PCR anplifikazioaren errore tasa murriztu daiteke fideltasun handiko DNA polimerasasa desberdinak erabiliz. Orain arte aurkitutako Taq DNA polimerasa guztien artean, Pfu entzimak du errore-tasarik txikiena eta fideltasun handiena duena (ikusi erantsitako taula). Entzimak hautatzeaz gain, ikertzaileek PCR mutazio tasa murriztu dezakete erreakzio baldintzak optimizatuz, buffer konposizioa optimizatuz, polimerasa termoegonkorraren kontzentrazioa eta PCR ziklo kopurua optimizatuz.
Produktuen kategoriak
ZERGATIK AUKERATU GARA
Sortu zenetik, gure fabrika mundu mailako lehen produktuak garatzen aritu da printzipioa betez
kalitatezko lehenik. Gure produktuek ospe bikaina lortu dute industrian eta bezero berrien eta zaharren artean konfiantza handia dute.
- Tel .: +86 010-59822688
- 5. eraikina, 86. zenbakia, Shuangying West Road, Changping barrutia, Beijing.
- people@tiangen.com
