TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

DNAren arazketa azkarra PCR antzemateko hainbat materialetatik.

TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kitak DNA genomiko azkarra prestatzeko eta PCR anplifikazioa lortzeko erreaktibo guztiak biltzen dituen bilgarri diseinu berezia hartzen du. Hainbat laginetako (landare-ehunak, haziak, animalien ehunak, odola, legamia eta bakterioak) eta ondorengo PCR anplifikazio eta detekzioaren arabera, DNAren genoma bakarreko purifikaziorako aplikagarria da. Proteinak, RNA eta beste bigarren mailako metabolitoak kentzea, disolbatzaile organikoa erauztea eta etanolaren prezipitazio urratsak ez dira beharrezkoak arazketa prozesu osoan, eragiketa erraza eta azkarra izan dadin. Produktuaren kalitatea egonkorra eta fidagarria da.

Kit honek eskaintzen duen 2 × Det PCR MasterMix bateragarria den PCR erreaktiboa da, DNA modu eraginkorrean eta zehatz handitu dezakeena, proteinak bezalako ezpurutasunak kendu beharrik gabe. Erreaktibo honek Taq DNA polimerasa, dNTPak, MgCl ditu₂, bufferra, baita PCR erreakziorako hobetzailea, optimizatzailea eta egonkortzailea ere. Erreaktiboa aplikatzeak PCR erreakzioa azkarra, sinplea, sentikorra, espezifikoa eta egonkorra bihurtzen du. Hori dela eta, kit hau bereziki egokia da errendimendu handiko proiekzioetarako.

Katua. Ez	Enbalatzeko neurria
4992527	20 µl × 50 rxn
4992528	20 µl × 200 rxn

Bidali mezu elektronikoa

Produktuaren xehetasuna

Adibide esperimentala

ohiko galderak

Produktuen etiketak

Ezaugarriak

■ Sinplea eta azkarra: ehun desberdinetako DNA 5 minututan erauz daiteke nitrogeno likidoa ehotzeko beharrik gabe.
■ Aplikazio zabalak: landareen hostoetan, hazietan, animalien ehunetan, odol laginetan (odol freskoa, antikoagulazioa, koaguluak, odol orban lehorrak eta abar), legamia eta bakterioetarako.
■ Bateragarritasun handia: PCR erreaktiboa lagin iturri desberdinetatik ateratako DNA anplifikatzeko egokia da.

Aplikazioak

■ Geneak hautematea: aukera ezin hobea eskala handiko geneak hautemateko.

Ohar garrantzitsuak

■ Fenol maila altua duten laginetan, hala nola kotoizko hostoetan, laginaren sarrerak 0,4 mg baino txikiagoa izan beharko luke, bestela PCR erreakzioari eragingo zaio.

Produktu guztiak ODM / OEMrako pertsonaliza daitezke. Xehetasunak lortzeko,mesedez sakatu Zerbitzu pertsonalizatua (ODM / OEM)

Aurreko: Transgenikoen laborantza erauzteko eta anplifikatzeko kit-a

Hurrengoa: Blood Direct PCR Kit

	ADNa 5 arto, gari, arroz, soja eta kotoizko hosto eta hazietako 5 mg erauzi zen, hurrenez hurren. ADNa PCR bidez anplifikatu zen primer zehatzak erabiliz. 20 μl eluente guztietako 6 μl DNA kargatu zen errei bakoitzeko. 1: Kontrol positiboaren genoma; 2: laginak utzi; 3: hazi laginak; 4: NTC; 5: D2000 primerak
	M: TIANGEN markatzailea D2000; 1: Kontrol positiboa; 2-7: iragazki paperean lehortutako odol orbanen kopurua 1-6 da hurrenez hurren; 8: Kontrol negatiboa. 3 mm-ko zulagailua iragazki paperetik lehortutako odol orbanak ateratzeko probarako material gisa hartzeko erabili zen. 20 μl eluente guztietako 6 μl DNA kargatu zen errei bakoitzeko.
	M: TIANGEN markatzailea D2000; 1: Kontrol positiboa (DNA genomikoa txantiloi gisa erabili zen); 2-7: gehitutako odol kopurua 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl eta 60 μl dira, hurrenez hurren; 8-13: gehitutako odol kopurua 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl eta 60 μl dira, hurrenez hurren; 14: NTC. 20 μl eluente guztietako 6 μl DNA kargatu zen agarosa gelera.

G: anplifikazio bandarik ez

A-1 txantiloia

■ Txantiloiak proteinen ezpurutasunak edo Taq inhibitzaileak ditu, etab. —— ADN txantiloia araztu, proteinen ezpurutasunak kendu edo txantiloia DNA atera arazketa kitekin.

■ Txantiloiaren desnaturalizazioa ez da osoa —— Desnaturalizazio tenperatura egoki handitu eta desnaturalizazio denbora luzatu.

■ Txantiloiaren degradazioa ——Berriz prestatu txantiloia.

A-2 Primer

■ Primeren kalitate txarra —— Primera berriro sintetizatu.

■ Primerraren degradazioa ——Aliquot kontzentrazio handiko primerak bolumen txikian kontserbatzeko. Saihestu izozte eta desizozte ugari edo epe luzeko 4 ° C kriokontserbatuak.

■ Primerren diseinu desegokia (adibidez, primeraren luzera ez da nahikoa, primeren artean sortutako dimeroa, etab.) -Prendiseinatu primerak (primeraren dimerra eta bigarren mailako egitura sortzea saihestu)

A-3 Mg²⁺kontzentrazioa

■ Mg²⁺ kontzentrazioa baxuegia da ——Mg behar bezala handitu²⁺kontzentrazioa: Mg optimizatu²⁺ kontzentrazioa 1 mM-tik 3 mM-ra bitarteko erreakzio batzuen bidez, 0,5 mM-ko tartearekin, Mg optimoa zehazteko²⁺ plantilla eta primer bakoitzeko kontzentrazioa.

A-4 Tenplatze tenperatura

■ Beroketa tenperatura altuak primeraren eta txantiloiaren loturan eragiten du. ——Erriztura tenperatura murriztu eta egoera optimizatu 2 ° C-ko gradientearekin.

A-5 Luzapen denbora

■ Luzapen denbora laburra —— Luzapen denbora handitu.

G: Gezurrezko positiboa

Fenomenoak: lagin negatiboek xede sekuentzia bandak ere erakusten dituzte.

A-1 PCR kutsadura

■ Helburu sekuentziaren edo anplifikazio produktuen kutsadura gurutzatua —— Kontuz sekuentzia xede duen lagina lagin negatiboan pipeta ez dadin edo isuri zentrifugazio hoditik. Erreaktiboak edo ekipoak autoklabatu egin beharko lirateke lehendik dauden azido nukleikoak ezabatzeko, eta kutsaduraren existentzia kontrol negatiboen esperimentuen bidez zehaztu beharko litzateke.

■ Erreaktiboen kutsadura ——Alikotatu erreaktiboak eta gorde tenperatura baxuan.

A-2 Primer

■ Mg²⁺ kontzentrazioa baxuegia da ——Mg behar bezala handitu²⁺ kontzentrazioa: Mg optimizatu²⁺ kontzentrazioa 1 mM-tik 3 mM-ra bitarteko erreakzio batzuen bidez, 0,5 mM-ko tartearekin, Mg optimoa zehazteko²⁺ plantilla eta primer bakoitzeko kontzentrazioa.

■ Primer diseinu okerra, eta xede sekuentziak homologia du xede ez den sekuentziarekin. ——Riseinatu primerak.

G: anplifikazio ez espezifikoa

Fenomenoak: PCR anplifikazio bandak ez datoz bat espero zen tamainarekin, handiak edo txikiak, edo batzuetan anplifikazio banda zehatzak eta anplifikazio banda ez espezifikoak gertatzen dira.

A-1 Primer

■ Primer espezifikotasun eskasa

——Riseinatu primer.

■ Primer kontzentrazioa altuegia da ——Naturazio tenperatura behar bezala handitu eta desnaturalizazio denbora luzatu.

A-2 Mg²⁺ kontzentrazioa

■ Mg²⁺ kontzentrazioa altuegia da ——Mg2 + kontzentrazioa behar bezala murriztu: Mg optimizatu²⁺ kontzentrazioa 1 mM-tik 3 mM-ra bitarteko erreakzio batzuen bidez, 0,5 mM-ko tartearekin, Mg optimoa zehazteko²⁺ plantilla eta primer bakoitzeko kontzentrazioa.

A-3 Polimerasa termoestagarria

■ Gehiegizko entzima kantitatea —— Enzima kantitatea egoki murriztu 0,5 U-ko tarteetan.

A-4 Tenplatze tenperatura

■ Beroketa tenperatura baxuegia da ——Berriztaketa tenperatura egoki handitu edo bi etapetako beroketa metodoa hartu.

A-5 PCR zikloak

■ PCR ziklo gehiegi —— PCR ziklo kopurua murriztu.

G: Patchy edo zikinkeria banda

A-1 Primer——Espezifizitate eskasa ——Mapa berriz diseinatu, primeraren posizioa eta luzera aldatu, bere espezifikotasuna hobetzeko; edo egin habiaratutako PCRa.

A-2 txantiloiaren DNA

——Txantila ez da purua—— Plantila araztu edo DNA atera arazketa kitekin.

A-3 Mg²⁺ kontzentrazioa

——Mg²⁺ kontzentrazioa altuegia da ——Mg behar bezala murriztu²⁺ kontzentrazioa: Mg optimizatu²⁺ kontzentrazioa 1 mM-tik 3 mM-ra bitarteko erreakzio batzuen bidez, 0,5 mM-ko tartearekin, Mg optimoa zehazteko²⁺ plantilla eta primer bakoitzeko kontzentrazioa.

A-4 dNTP

——DNTPen kontzentrazioa altuegia da ——DNTPren kontzentrazioa egoki murriztu

A-5 Errekurtso tenperatura

——Tiratze tenperatura baxuegia ——Tiro tenperatura behar bezala handitu

A-6 Zikloak

——Ziklo gehiegi ——Zikloaren zenbakia optimizatu

G: Zenbat DNA plantila gehitu behar da 50 μl PCR erreakzio sistema batean?

G: Nola anplifikatu zati luzeak?

Lehenengo pausoa polimerasa egokia aukeratzea da. Taq polimerasa erregularrak ezin du zuzendu 3'-5 'exonukleasa aktibitatea falta delako eta ez datoz bat zatien luzapenaren eraginkortasuna asko murriztuko du. Hori dela eta, Taq polimerasa erregularrak ezin ditu 5 kb baino handiagoak diren xede zatiak handitu. Aldaketa berezia duen Taq polimerasa edo fideltasun handiko beste polimerasa hautatu behar da luzapenaren eraginkortasuna hobetzeko eta zati luzeko anplifikazioaren beharrak asetzeko. Gainera, zati luzeen anplifikazioak primeraren diseinua, desnaturalizazio denbora, luzapen denbora, buffer pH-a eta abar egokitzea ere eskatzen du. Normalean, 18-24 bp-ko primerek errendimendu hobea izan dezakete. Txantiloiaren kalteak ekiditeko, 94 ° C-ko desnaturalizazio-denbora 30 segundotan edo gutxiagora murriztu behar da ziklo bakoitzeko, eta tenperatura 94 ° C-ra igotzeko anplifikazioa egin aurretik minutu 1 baino gutxiago izan behar da. Gainera, luzapen-tenperatura 68 ° C-tan kokatzeak eta luzapen-denbora 1 kb / min-ko abiaduraren arabera diseinatzeak zati luzeen anplifikazio eraginkorra ziurtatu dezake.

G: Nola hobetu PCRren anplifikazio fideltasuna?

PCR anplifikazioaren errore tasa murriztu daiteke fideltasun handiko DNA polimerasasa desberdinak erabiliz. Orain arte aurkitutako Taq DNA polimerasa guztien artean, Pfu entzimak du errore-tasarik txikiena eta fideltasun handiena duena (ikusi erantsitako taula). Entzimak hautatzeaz gain, ikertzaileek PCR mutazio tasa murriztu dezakete erreakzio baldintzak optimizatuz, buffer konposizioa optimizatuz, polimerasa termoegonkorraren kontzentrazioa eta PCR ziklo kopurua optimizatuz.

Idatzi hemen zure mezua eta bidali iezaguzu